細菌回復突變試驗(Bacterial Reverse Mutation Test),又稱Ames試驗,是以營養缺陷型的突變體菌株為指示生物檢測基因突變的體外試驗,可檢測一個或數個堿基對的置換、增加或缺失造成的點突變,在食品、藥品、化學品、化妝品、農藥、醫療器械等多個領域中得到了廣泛的應用。
1 Ames試驗菌株及菌株鑒定
常用的Ames菌株有組氨酸營養缺陷型鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella Typhimurium)或色氨酸缺陷型大腸桿菌(Escherichia coli)。為保證檢測結果的可靠性,Ames試驗需使用菌株組合進行試驗。推薦的菌株組合方案如下:
鼠傷寒沙門氏菌TA1535
鼠傷寒沙門氏菌TA97a或TA97或TA1537
鼠傷寒沙門氏菌TA98
鼠傷寒沙門氏菌TA100
鼠傷寒沙門氏菌TA102或大腸桿菌WP2uvrA或大腸桿菌WP2uvrA(PKM101)
表1 常用Ames試驗菌株突變基因和檢測類型
然而,因突變型菌株的某些特性易丟失或變異,故需根據實際需求對菌株的基因型進行鑒定,保證菌株特性符合Ames試驗的要求。尤其是在遇到以下情況時,更應該對菌株特性進行確認:
(1)投入使用前;
(2)在收到培養菌株后;
(3)當自發回變數不在正常范圍內時;
(4)當對標準誘變劑喪失敏感性時;
(5)當需重新進行菌株保藏時;
(6)當使用主平板進行傳代時。
表2 試驗菌株生物學特性鑒定標準
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