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品牌 | IPHASE | 貨號 | 082A01.11/082A01.12 |
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規格 | 5million | 供貨周期 | 現貨 |
主要用途 | 免疫調節,分選T細胞,B細胞 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業,制藥 |
人外周血單個核細胞 Human PBMC
外周血單個核細胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是指外周血中具有單個細胞核的細胞,包括淋巴細胞,單核細胞等。
提取方法:
全血樣本聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)密度梯度離心分離
其他種屬PBMC
猴外周血單個核細胞 Monkey PBMC
大鼠外周血單個核細胞 Rat PBMC
小鼠外周血單個核細胞 Mouse PBMC
比格犬外周血單個核細胞 Dog PBMC
豬外周血單個核細胞 Minipig PBMC
兔外周血單個核細胞 Rabbit PBMC
外周血單個核細胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC),是指外周血中具有單個核的細胞,包括淋巴細胞(Lymphocyte)、單核細胞(Monocyte)、樹突狀細胞(DC)和其他少量細胞。PBMC可利用健康人或動物供體的外周血,通過Ficoll密度梯度離心,磁珠分選等步驟獲得,主要包括淋巴細胞和單核細胞。
Ficoll是蔗糖的多聚體,中性,平均分子量400,000,當密度為1.2g/mL,未超出正常生理性滲透壓,也不穿過生物膜。紅細胞、粒細胞比重大,離心后沉于管底;淋巴細胞和單核細胞的比重小于或等于分層液比重,離心后漂浮于分層液的液面上,也可有少部分細胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細胞,就可從外周血中分離到單個核細胞。
人外周血單個核細胞 Human PBMC
不同細胞類型的比例
PBMC中大部分都是淋巴細胞,包括B細胞和T細胞,其中CD3 T細胞又占了淋巴細胞中絕大部分(45-70%)。這些T細胞都處于初始(naive)狀態,即已經成熟了但沒有受到抗原刺激。 在正常人中,只有非常小的一部分初始T細胞會因抗原識別而被激活。同樣的B細胞也都處于初始狀態。相對于淋巴細胞,單核細胞的比例在10-30%,收到刺激之后會發育成樹突狀細胞(DC)或巨噬細胞。干細胞的比例非常低,只有0.1-0.2%,因此很難從全血樣本中分離到。
細胞運輸與保存
(1)干冰運輸,收到細胞后立即轉入液氮凍存或直接復蘇;
(2)T25瓶運輸細胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存,具體操作步驟見細胞培養步驟。
PBMC收到后注意事項:
(1)收到PBMC細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,若有上述現象發生請及時反饋。
(2)先不打開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放培養箱靜置四小時,穩定細胞狀態,切忌在溫箱內靜置過夜。
(3)靜置后鏡檢,拍照,記錄細胞狀態。建議傳代后也拍照記錄細胞生長情況。
(4)貼壁細胞:若細胞密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,收集細胞瓶內的培養基,留8ml繼續培養至80%左右再傳代,瓶蓋可稍微擰松。
(5)細胞瓶內的培養基含血清和雙抗,可收集后4℃保存備用,可補加2%血清。剛開始傳代時建議一半用細胞瓶內的培養基,一半用自備的培養基,使細胞逐漸適應培養條件,以免因不適應而造成生長狀態不佳。
(6)細胞胰酶消化液建議使用PBS配制。
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